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分離和提純蛋白質(zhì)的基本原理
點(diǎn)擊次數(shù):566 更新時間:2024-11-06

分離純化蛋白質(zhì)的方法及原理

(一)利用分子大小

1、透析:將待提純蛋白質(zhì)放在透析袋中放在蒸餾水中進(jìn)行 。原理:利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的性質(zhì),使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)如無機(jī)鹽、單糖、水等分開。

2、超過濾:利用壓力和離心力,強(qiáng)行使其他小分子和水通過半透膜,而蛋白質(zhì)留在膜上。

3、凝膠過濾層析。原理:當(dāng)不同分子大小的蛋白質(zhì)混合物流進(jìn)凝膠層析柱時,比凝膠網(wǎng)孔大的分子不能進(jìn)入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),排阻在凝膠珠以外,在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。而比孔小的分子不同程度地進(jìn)入凝膠珠內(nèi),這樣由于不同大小分子所經(jīng)歷的路徑不同而到分離。

(二)利用溶解度差別

4、等電點(diǎn)沉淀。原理:不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn),當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物調(diào)到其中一種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時,這種蛋白質(zhì)大部分和全部被沉淀下來.。

5、鹽析與鹽溶 。原理:低濃度時,中性鹽可以增加蛋白質(zhì)溶解度這種現(xiàn)象稱為鹽溶.當(dāng)離子強(qiáng)度增加,足夠高時,例如飽和或半飽和程度,很多蛋白質(zhì)可以從水中沉淀出來,這種現(xiàn)象稱為鹽析。

(三)根據(jù)電荷不同

6、SDS-PAGE 全稱 十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳。原理:通過加熱和SDS可以使蛋白質(zhì)變性,多亞基的蛋白質(zhì)也解離為單亞基,處理后的樣品中肽鏈?zhǔn)翘幱跓o二硫鍵連接的,分離的狀態(tài)。電泳時SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響,而主要取決于蛋白質(zhì)分子量。所以SDS-PAGE常用來分析蛋白質(zhì)的純度和大致測定蛋白質(zhì)的分子量。

7、離子交換層析。原理:氨基酸分離常用陽離子交換樹脂,樹脂被處理成鈉型,將混合氨基酸上柱,氨基酸主要以陽離子形式存在,在樹脂上與鈉離子發(fā)生交換,而被掛在樹脂上。

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