確保充分的細(xì)胞生長是細(xì)胞培養(yǎng)和收集精-確數(shù)據(jù)的一個關(guān)鍵部分。對于單層生長的細(xì)胞，融合度定義為顯微鏡觀察到被一層細(xì)胞覆蓋的培養(yǎng)器皿表面積的百分比。比如，50%細(xì)胞融合是指一半的培養(yǎng)皿/瓶等的表面被細(xì)胞覆蓋。對于懸浮細(xì)胞，通常用細(xì)胞系或類型的細(xì)胞密度衡量其生長過程，但或許也可通過濁度增加和培養(yǎng)基顏色穩(wěn)定評估“融合“。
培養(yǎng)中的細(xì)胞生長一般發(fā)生在四個階段，隨著時間推移的細(xì)胞計(jì)數(shù)的對數(shù)形成一個S型曲線(S-型)，不同細(xì)胞系和培養(yǎng)物在每個階段需要的時間有很大差異。
1.停滯期：細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)條件的階段，細(xì)胞在此階段不分裂。細(xì)胞通常在起始培養(yǎng)后的24小時內(nèi)附著，該階段的總時長取決于培養(yǎng)之初使用細(xì)胞的生長階段和接種密度。
2.對數(shù)期：細(xì)胞在此階段積極分裂，是評估群體生長和通用數(shù)據(jù)收集的-佳時間。對數(shù)期的后期，過度擁擠導(dǎo)致細(xì)胞脅迫之前是傳代細(xì)胞(亞培養(yǎng))的-佳時機(jī)。
3.平穩(wěn)期：隨著細(xì)胞達(dá)到100%融合，細(xì)胞在此階段生長放緩，不足1/10的細(xì)胞處于活躍細(xì)胞周期。細(xì)胞在此階段容易受傷，因此需要小心觀察以確保細(xì)胞在此階段之前或之初進(jìn)行傳代。
4.衰退期：細(xì)胞周期的自然組成部分。在此階段，隨著細(xì)胞死亡占據(jù)主導(dǎo)地位，活細(xì)胞群體數(shù)量減少。
評估細(xì)胞生長
準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)對評估培養(yǎng)的細(xì)胞生長是至關(guān)重要，因?yàn)殄e誤的計(jì)數(shù)會導(dǎo)致關(guān)于細(xì)胞健康的錯誤結(jié)論。細(xì)胞計(jì)數(shù)可以使用血球計(jì)數(shù)板、自動計(jì)數(shù)器進(jìn)行。
預(yù)防和消除細(xì)胞生長問題的常規(guī)技巧和技術(shù)
1.除了遵循良好的無菌操作實(shí)踐以防止微生物和化學(xué)污染外，細(xì)胞生長問題的早期診斷和處理的關(guān)鍵是對培養(yǎng)物的頻繁觀察和詳細(xì)的記錄保存。
2.同樣重要的是需要考慮解決問題-有效的方式是詳細(xì)和耗時的尋找細(xì)胞生長不佳的罪魁禍?zhǔn)祝€是-好簡單地使用新的試劑、儲存液和物資重新開始。
仔細(xì)地觀察
為了解決細(xì)胞生長問題，必須首先意識到問題的存在。許多生長問題都是微妙的，所以定期、詳細(xì)的觀察實(shí)驗(yàn)中所有培養(yǎng)器皿是非常必要的。顯微鏡下的快速評估可能是不夠的，許多特殊的生長模式在細(xì)胞固定和染色之前并不明顯。另外，仍需定期檢查培養(yǎng)基和其他試劑是否污染。
精-確記錄
當(dāng)試圖診斷和解決細(xì)胞生長不良的問題時，擁有關(guān)于培養(yǎng)各個方面的好筆記可以節(jié)省時間、金錢和珍貴的修飾細(xì)胞如敲除細(xì)胞系。比如，標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞密度、記錄儲存細(xì)胞的傳代次數(shù)對判斷儲存液是否可能為問題來源至關(guān)重要。同樣，在得出某批次培養(yǎng)基是罪魁禍?zhǔn)椎慕Y(jié)論之前，必須首先確保哪些培養(yǎng)皿使用了這一批次。
需要記錄的重要信息包括所有凍存管的來源、身-份證明、無污染、傳代次數(shù)、細(xì)胞密度、冷凍和儲存方法等。使用的所有試劑的成分和濃度、批號、*打開和使用日期都應(yīng)該記錄下來。所有培養(yǎng)器皿的批號也應(yīng)該記錄。細(xì)胞培養(yǎng)個方面的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)化和遵循，所有凍存管和培養(yǎng)器皿的精-確和詳細(xì)標(biāo)簽都是至關(guān)重要的。注意小細(xì)節(jié)，比如培養(yǎng)箱清理和保養(yǎng)的時間、CO2罐更換的時間、培養(yǎng)室后篩查支原體的時間，并記錄任何異常的事件。
知道何時止損
有時，發(fā)現(xiàn)問題的確切來源不像解決它那么重要，因此，立即修復(fù)多個潛在的導(dǎo)致生長不良的原因比嘗試隔離確切的問題更節(jié)約時間和成本。比如，使用新的儲存細(xì)胞和所有新的培養(yǎng)基、血清、緩沖液等重新開始，比分別獨(dú)立嘗試各物料的新批次直到發(fā)現(xiàn)罪魁禍?zhǔn)赘虾跚槔怼?/p>
