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什么是核蛋白?核蛋白的提取方法介紹
點擊次數(shù):1122 更新時間:2023-10-19

核蛋白的簡介

核蛋白(nucleoprotein)因其最初發(fā)現(xiàn)于細胞核中,故稱為核蛋白,它是細胞中的一種結(jié)合蛋白質(zhì)。在細胞核及細胞質(zhì)中都含有核蛋白。此外,在病毒、染色體和核蛋白體中也含有核蛋白。核蛋自在生物的生長和繁殖過程中有著du特的功能和作用。

核蛋白是由帶陽離子性質(zhì)的堿性蛋白質(zhì)(如組蛋白和魚精dan白)和蛋白質(zhì)輔基(核酸)所構(gòu)成。組蛋白含有堿性氨基酸(如賴氨酸和精an酸),所以具有堿性。其相對分子質(zhì)量為11 000~21 000。魚精dan白存在于某些魚精核蛋白中,由于富含精an酸,因此也具有堿性。

核蛋白的提取方法

柱式法 Minute TM 胞質(zhì)胞核分離試劑盒操作方法:

A. 懸浮細胞樣品(包括植物,細菌,酵母和真菌制備的原生質(zhì)體)

1.500Xg,3 分鐘低速離心收集細胞,用預冷的 PBS 清洗一次

2. 將細胞轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 離心管中,3000 rpm 離心 1-5 分鐘,棄去上清。

3. 加入適量的胞漿提取緩沖液(請注意樣品及裂解液的比例,以達到最佳效果), 渦旋大力震蕩 15 秒, 冰上孵育 5 分鐘, 混勻. 接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。

B. 貼壁細胞

1. 貼壁細胞生長至融合度 90-100%,將預冷的 PBS 直接加入細胞培養(yǎng)板,培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中清洗細胞兩次,吸去上清。

2. 將適量的胞漿提取緩沖液均勻的加入整個器皿表面,冰上靜置 5 分鐘。用吸頭吹打幾次后轉(zhuǎn)移到預冷的 1.5 ml 離心管中。渦旋大力震蕩 15 秒。接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。(請注意樣品及裂解液的比例,如濃度較低請減少裂解液使用量)

C.組織樣品

1. 稱重適量組織樣品,放入預冷的 1.5 ml 離心管中。

2. 用預冷的 PBS 清洗組織樣品一次。3000rpm 離心 1 分鐘,棄去上清,盡可能的使沉淀干燥。

3. 加入適量胞漿提取緩沖液,用微型管杵或微粉碎機勻漿,去除沒有wan全勻漿的組織碎片。接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。

胞質(zhì)胞核分離步驟

1. 4oC,最高速 (14000-16000 rpm) 離心 5 分鐘

2. 將上清液(上清為胞漿組份)轉(zhuǎn)移到一個新的預冷的 1.5 ml 離心管中。將沉淀(可選優(yōu)化:用 0.5 ml 預冷 PBS 重懸,10000 rpm,離心 3-5 分鐘清洗沉淀可以減少胞漿蛋白污染)中加入適量的胞核提取緩沖液,渦旋大力震蕩 15 秒,冰上孵育 1 分鐘。

然后重復震蕩 15 秒,冰上孵育 1 分鐘四次。(如核蛋白提取濃度低,可適當延長每次孵育及震蕩時間)

3. 迅速將核提取物轉(zhuǎn)入到預冷的離心管套管中,14000-16000 rpm,離心 30 秒。棄掉離心管柱。將核蛋白儲存于-80℃。一般產(chǎn)量 1.5-2.5 mg/ml。


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